The Growth Inhibition Effect on the Bacterial Vaginosis Causative Bacteria by Citric Acid and Trisodium Phosphate

Bacterial vaginosis (BV) is the most frequent vaginal disease being apt to relapse. The growth inhibition effect of the mixture of citric acid (CA) and trisodium phosphate (TSP) on BV causative bacteria and probiotics was measured. Gardnerella vaginalis was reduced to zero in WCCT-1 (CA 0.25% and TSP 0.55% in Wilkins-Chalgren broth), 2.0 x 10(4)/ml in WCCT-2 (CA 0.5% and TSP 0.8% in WC), and 3.3 x 10(3)/ml in WCCT-3 (CA 1.0% and TSP 2.6% in WC) comparing with 1.3 x 10(5)/ml in WC after 48 h. Bacteroides fragilis was reduced to 6.0 x 10(3)/ml in WCCA (CA 0.34% in WC), 2.3 x 10(2)/ml in WCCT (CA 0.5% and TSP 0.2% in WC), 7.0 x 10(3)/ml in WCHCl (HCl in WC) after 48 h. Mobiluncus mulieris was reduced to 1.08 x 10(4)/ml in WCCA, 1.03 x 10(3)/ml in WCCT, and 10 ea/ml in WCHCl after 48 h. Peptostreptococcus asaccharolyticus was completely inhibited in WCCA, WCCT, and WCHCl after 24 h. Probiotics, Steroidobacter denitrificans YH1 (3.4 x 10(7)/ml) and Lactobacillus crispatus YH2 (2.7 x 10(6)/ml), grew to 1.25 x 10(8)/ml and 2.6 x 10(7)/ml in MRSCA (CA 1.0% in MRS), 1.8 x 10(7)/ml and 4.6 x 10(6)/ml in MRSCT (CA 1.5% and TSP 0.58% in MRS), 1.2 x 10(8)/ml and 2.3 x 10(7)/ml in MRSHCl after 48 h, respectively. These results mean that the CA-TSP mixture can be used as the useful vaginal pH controller, growth inhibitor on BV causative bacteria, and an efficient means for settlement of probiotics.

The Growth Inhibition Effect on the Causative Bacteria of Bacterial Vaginosis by Bacterial Strains Isolated from the Vagina of a Healthy Woman

Two Gram-positive rod strains isolated from the healthy vagina of a woman were tested for the possibility as probiotics. One strain was identified as Steroidobacter denitrificans (YH1) and the other as Lactobacillus crispatus (YH2) by 16S rRNA partial sequencing. The Casman agar and Man-Rogosa-Sharpe (MRS) agar were mixed in same quantity, supplemented with 5% human rbc lysate (CMB agar). The Wilkins-Chalgren agar and MRS agar were mixed in same quantity (WCM agar). Gardnerella vaginalis was cultured in Casman broth, supplemented with 5% human rbc lysate and 1,000 x-diluted with normal saline. Bacteroides fragilis, Mobiluncus mulieris and Peptostreptococcus asaccharolyticus were cultured in Wilkins-Chalgren anaerobe broth and 2,000x-diluted. S. denitrificans YH1 and L. crispatus YH2 were cultured in MRS broth anaerobically and 100x-diluted. The diluted suspensions of B. fragilis, M. mulieris and P. asaccharolyticus were inoculated on WCM agar and G. vaginalis on CMB agar by cotton swabs. Ten microl aliquots of YH1 and YH2 were inoculated on the center of WCM agar and CMB agar. The growth inhibition zone diameters of B. fragilis, G. vaginalis, M. mulieris and P. asaccharolyticus by YH1 were 35 mm, 35 mm, 25 mm and 60 mm. The inhibition diameters by YH2 were 25 mm, 30 mm, 20 mm and 40 mm, respectively. These results implicate that S. denitrificans YH1 can be the stronger probiotics for the treatment of bacterial vaginosis than L. crispatus, compared inhibition zone diameters by YH1 and YH2.

O exame do sêmen na infertilidade masculina: V-exame microbiológico / The microbiological examination of the sêmen to evaluate male infertility

Neste artigo, o autor revisa o papel do exame microbiológico do sêmen para avaliar infertilidade masculina. São descritos os efeitos negativos de bactérias aeróbicas e anaeróbicas, micoplasmas, fungos, Trichomonas sp., Chlamydia trachomatis, Gardnerellavaginalis e Mobiluncus sp. na qualidade do sêmen. A influência de leucocitospermia e bacteriospermia também é revisada. Simultaneamente,também são feitas algumas considerações sobre metodologias atualmente usadas para investigar estes microrganismos no sêmen.

In this article, the author reviews the role of the microbiological examination of the semen to evaluate male infertility.They are described negative effects of aerobic and anaerobic bacteria, mycoplasmas, fungi, Trichomonas sp., Chlamydia trachomatis, Gardnerella vaginalis and Mobiluncus sp. on the semen quality. Influence of leukocytosp.ermia, and bacteriosp.ermia are also reviewed. Simultaneously, they are also made some considerations about methodologies currently used to investigate these microorganismson semen.

Prevalência de gardnerella e mobiluncus em exames de colpocitologia em Tomé-Açu, Pará / Prevalence of gardnerella and mobiluncus in vaginal cytology examinations in Tome-Açu-Pará

Objetivo: a Gardnerella vaginalis, isoladamente ou associada ao Mobiluncus sp., é um dos principais agentes causadores de infecções em mulheres em idade reprodutiva, seja pela falta de hábitos de higiene adequados, número de parceiros sexuais ou desequilíbrios da microflora vaginal. Assim, buscou-se verificar a prevalência de G vaginalis e/ou Mobiluncus sp., associadas às condições sócio-culturais em mulheres atendidas no Hospital de Quatro Bocas de Tomé-Açu - Pará, através de exame preventivo de câncer de colo do útero. Método e Resultados: analisados materiais cervico-vaginais e informações sócio-culturais de 156 mulheres, com faixas etárias de 17 e 73 anos, período de outubro de 2003 a julho de 2004, para o diagnóstico de prevenção de câncer ginecológico. Todas as amostras foram processadas de modo convencional e analisadas no Laboratório de Citopatologia da Universidade Federal do Pará por três observadores (estudo cego). Como resultados verificou-se que das 156 mulheres pesquisadas , a maior prevalência estava associada à G vaginalis (48,15%), faixa etária de 21 a 30 anos, ou pela associação G vaginalis e Mobiluncus sp (36,36%). Em relação ao grau de escolaridade e ocupação, a maior prevalência ocorreu em mulheres com r grau incompleto (47,37%), com atividades do lar (21,05%) e comércio (22,81%). Conclusões: estes dados reforçam pesquisas que relacionam a prevalência de G vaginalis e/ou Mobiluncus sp, em mulheres com vida sexual e menor grau de escolaridade.

Objective: gardnerella vaginalis, alone or associated to Mobiluncus sp., is one of the main etiological agents ofinfection in women of reproductive age, due to lack of appropriate hygiene habits, number of sexual partners ar imbalance of the vaginal microbiota. Therefore, our objective was to assess the prevalence of bacterial vaginosis caused by G vaginalis and/or Mobiluncus sp., and associate this to the sociocultural conditions in women attended ai Hospital de Quatro Bocas in Tomé-Açu - Pará - Brazil, through gynecological cancer screening. Methods and Results: cervico-vaginal smears and socio-cultural information of 156 women aged 17 to 73 were analyzedfor diagnosis and prevention of gynecological cancer from October 2003 to July 2004. Ali samples were processed in the conventional way and analyzed at Universidade Federal do Pará's Laboratory of Cytopathology by three observers (a blind study). Among ali 156 women, the largest prevalence was associated to G vaginalis (48,15%) in 21 to 30- year-old women, ar to the association of G vaginalis and Mobiluncus sp (36,36%). As for the occupation and instruction degree, the infection was most prevalent in women with incomplete primary school (47,37%), housewives (21,05%) and market workers (22,81 %). Conclusions: our data reaffirm previous researches that relate the prevalence ofbacterial vaginosis caused by G vaginalis and /or Mobiluncus sp. to low instruction degree in sexually active women.

Vaginosis bacteriana en estudiantes universitarias de Antofagasta / BacteriaI vaginosis in university students of Antofagasta

The bacterial vaginosis (VE) is a clinical entity that one has proposed as sexually transmitted disease (ETS), which still is in discussion, provided that the principal agents etiologic (Gardnerella vaginalis and Mobiluncus spp), also are a part of the normal vaginal flora. VE's prevalence was investigated according to the Nugent's microbiological and Amsel's clinical criteria between 190 university students of Antofagasta city who consult spontaneously, during April and October, 2006. Other agents (bacteria, fungi and parasites) isolated of the vaginal secretion were diagnosed by means of standardized methods. One found a prevalence of 19% (36/190) of VE and 38% (72/190) of other pathologies: Candida albicans 76% (55/72); bacteria, predominating over Enterobacteriaceas 15% (21/72) and Trichomonas vaginalis 3% (2/72). One concludes that the high indicators of VE and other infectious pathologies of ETS's type in this group of women who begin in the sexual activity it needs of major educational support, special1y the related ones to the entity bacterial vaginosis, who still is not very frequently studied in these groups.

La vaginosis bacteriana (VB) es una entidad clínica que se ha propuesto como enfermedad de transmisión sexual (ETS), lo cual aún está en discusión, dado que los principales agentes etiológicos (Gardnerella vaginalis y Mobiluncus spp), también son parte de la flora normal vaginal. Se investigó la prevalencia de VB, según los criterios microbiológico de Nugent y clínico de Amsel en 190 estudiantes universitarias de la ciudad de Antofagasta que consultan espontáneamente, durante abril y octubre del 2006. Otros agentes patógenos (bacterias, hongos y parásitos) aislados de la secreción vaginal fueron diagnosticados mediante técnicas estandarizadas. Se encontró una prevalencia del 19% (36/190) de VB y 38% (72/190) de otras patologías causadas por: Candida albicans 76% (55/72); bacterias, predominando Enterobacteriaceas 15% (21/72); Y Trichomonas vaginalis 3% (2/72). Se concluye que los elevados indicadores de VB y de otras patologías infecciosas del tipo de las ETS, en este grupo de mujeres que se inician en la actividad sexual, requiere de mayor apoyo educativo y profiláctico, especialmente las relacionadas con la entidad vaginosis bacteriana, la cual aún no es muy frecuentemente estudiada en estos grupos etarios.

Avaliação do método Papanicolaou para triagem de algumas infecções cérvico-vaginais / Evaluation of the method of Papanicolaou for screening of some cervico-vaginal infections

Tem crescido o interesse na utilização da citologia de Papanicolaou (Pap) para o reconhecimento de infecções cérvicovaginais, como uma importante alternativa diagnóstica. O presente trabalho objetivou avaliar a acurácia diagnóstica da citologia de Pap no Laboratório Oswaldo Cruz de Paranavaí – Paraná, para algumas dessas infecções. Foi realizado um levantamento de dados nos anos de 2003/2004 e foram incluídas as pacientes que tinham resultado de Pap e também de outro exame para o diagnóstico dos seguintes agentes infecciosos: Candida sp, Gardnerella vaginallis, Mobiluncus sp, Leptothrix sp, Papillomavirus humano (HPV) e Trichomonas vaginalis. Para os quatro primeiros agentes, considerou-se também os resultados da bacterioscopia de secreção vaginal (Gram), para HPV os da Captura Híbrida (Digene®) e para T. vaginalis os do exame a fresco de secreção vaginal. Foram incluídos resultados de 1021 pacientes e as infecções mais freqüentes foram candidíase (188 casos, 18,41%) e vaginose bacteriana (142 casos, 13,9%). HPV foi diagnosticado em 14 casos (1,4%), Leptothrix sp em 11 (1,1%) e T. vaginalis em 5 (0,5%). A especificidade de Pap para candidíase e vaginose bacteriana foi de 99,4% e 98,1%, e a sensibilidade de 32,8 % e 56,8 %, respectivamente. Para candidíase, a freqüência de falso positivo (FP) do Pap foi de 13,0%, a de falso negativo (FN) de 7,7 % e a eficiência de 87,5%. Para vaginose bacteriana, FP foi de 5,8%, a FN 19,3% e a eficiência de 93,0%. Em nossa casuística, o método de Pap mostrou-se aplicável para triagem de candidíase e vaginose bacteriana, principalmente para excluir estas patologias, uma vez que os valores de especificidade obtidosforam muito elevados

Vaginose bacteriana. É a falta de infiltrado inflamaatório vaginal um fator importante? / Bacterial vaginosis is the lack of vaginal inflammatory infiltrate an important phenomenon?

Vaginose bacteriana é uma condição comum em serviços de saúde da mulher. Seu diagnóstico tem sido dado usando oscritérios de Amsel e escore de Nugent. Alguns estudos têm mostrado a associação da vaginose bacteriana com leucopenia vaginal, mas a leucocitose pode eventualmente ser observada, o que tem causado certa confusão nas definições de vaginose e vaginite. Neste estudo foram avaliados 290 casos de vaginose bacteriana usando esfregaços corados pelo Papanicolaou e pelo Gram. Evidenciouse a freqüente associação de Mobiluncus sp e Gardnerella vaginalis e suas relações com leucopenia vaginal. Embora na presença de bacilos curvos pareça haver tendência a leucocitose isto não é uma constante, já que mesmo na sua ausência a leucocitose pode ocorrer.Assim, o complexo mecanismo da anaerobiose vaginal justifica a heterogeneidade no número de leucócitos. Dessa forma poucos leucócitos em esfregaços vaginais é um aspecto freqüente, embora não de importância para o diagnóstico clínico da vaginose bacteriana.

Bacterial vaginosis is a common condition diagnosed at women’s health services. Its diagnosis has been made using Amsel’s criteria and Nugent score. Some studies have showed the association between anaerobes of bacterial vaginosis and vaginal leucopenia. But the presence of leukocytes on Pap smears in bacterial vaginosis occurs and leads to confuse definitions of vaginosis and vaginitis. Studying 290 cases of bacterial vaginosis, using Pap smears and Gram, this report showed the frequent association diagnosticated by cytomorphology of Gardnerella and Mobiluncus and their relation with vaginal leucopenia. Although the presence of curved rods can be associated with leucocytosis, this is not a constant situation. Even in their absence the leucocytosis can occur. By the way, the complex mechanisms of vaginal anaerobiosis justify the heterogeneity of number of leukocytes. So, although few leukocytes in vaginal smear is frequent, it is not an important phenomenon to clinical diagnose of bacterial vaginosis.

Vaginose bacteriana / Bacterial vaginosis

A vaginose bacteriana VB é caracterizada pela substituição da flora vaginal, na qual há predomínio de lactobacilos, por complexa e abundante flora de bactérias anaeróbicas.Leucorréia abundante e fétida é o sintoma típico dessa infecção.Tais bactérias seriam capazes de produzir enzimas, proteases, que degradariam o muco secretado pela cérvice, rompendo dessa maneira a barreira protetora dos epitélios vaginal e cervical.Vaginose bacteriana parece estar associada a várias doenças sexualmente transmissíveis, doença inflamatória pélvica e trabalho de parto prematuro

Contagem de morfotipos de Mobiluncus sp e concentração de leucócitos em esfregaços vaginais de pacientes com vaginose bacteriana / Mobiluncus sp morphotype counts and leukocyte concentrations in vaginal smears of patients with bacterial vaginosis

Objetivos: pesquisar em casos de vaginose bacteriana a presença de bacilos curvos, sugerindo Mobiluncus, e de leucocitose em esfregaços vaginais corados por Gram e Papanicolaou. Métodos: duzentos e cinco pacientes com diagnóstico de vaginose bacteriana pelos Critérios de Amsel foram incluídas e avaliadas clinicamente por um dos autores (JEJ). Os esfregaços vaginais foram corados pelo método de Papanicolaou e avaliados pela técnica de Gram. Nos esfregaços de Gram foram estudados o escore de Nugent e a presença de bacilos curvos. Nos esfregaços de Papanicolaou foi avaliada a presença de bacilos curvos e de leucócitos. Os dados foram analisados usando Prism 3.0® com intervalo de confiança de 95 por cento, usando teste exato de Fisher pelo método modificado de Wald. Resultados: nos esfregaços de Papanicolaou, bacilos curvos estiveram presentes em 51,7 por cento das vezes. O número de leucócitos variou, embora a presença de poucos leucócitos tenha sido mais freqüente. Nos esfregaços de Gram, bacilos curvos foram observados em 46,8 por cento e o escore de Nugent foi 8 em 48,3 por cento dos casos. O achado de Mobiluncus sp pelos dois métodos ocorreu em 82 por cento. Na presença de bacilos curvos, um maior número de leucócitos foi observado em 57,5 por cento dos casos (p<0,0001) e quando o escore de Nugent foi de 9 e 10, a leucocitose ocorreu em 25,6 e 37,2 por cento das vezes, respectivamente. Conclusões: bacilos curvos são observados, morfologicamente, em cerca de 52 por cento dos casos de vaginose bacteriana. Leucocitose é mais observada na presença de Mobiluncus sp e em casos com escores de Nugent mais altos.

Diagnóstico microbiológico de vaginosis bacteriana / Microbiological diagnosis of bacterial vaginosis

Se estudiaron exudados vaginales de 360 mujeres con aumento del flujo vaginal. Las muestras fueron obtenidas de fondo de saco, endocervix y posteriormente procesadas. En las muestras endocervicales se investigó Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum, mientras que en las muestras de fondo de saco se investigaron otras bacterias, hongos y parásitos. El diagnóstico de vaginosis bacteriana (VB) se realizó teniendo en cuenta los criterios de Amsel: pH, prueba de las aminas (KOH 10 por ciento) y la observación de clue cells por coloración de Gram. Las cepas de Gardnerella vaginalis fueron aisladas por cultivo en placas de agar sangre humana al 5 por ciento e identificadas por pruebas bioquímicas. El 23,9 por ciento de los aislamientos correspondió a G. vaginalis, el 21,9 por ciento a Candida albicans, el 14,2 por ciento a Trichomonas vaginalis, el 11,7 por ciento a C. trachomatis, el 5,5 por ciento a N. gonorrhoeae, U. urealyticum el 4,2 por ciento y M. hominis el 2,7 por ciento. Por coloración de Gram se observó un 8,2 por ciento de formas compatibles con Mobiluncus spp. Las asociaciones más frecuentes de G. vaginalis fueron con C. albicans (14,3 por ciento), T. vaginalis (14,3 por ciento), C. trachomatis (14,3 por ciento). De las 360 mujeres estudiadas, 37 presentaron más de un microorganismo patógeno. La relación entre el aislamiento de G. vaginalis y presencia de clue cells fue del 95,2 por ciento, presentando una sensibilidad del 95,2 por ciento, especificidad del 100 por ciento y el valor predictivo positivo del 100 por ciento

Gardnerella vaginalis y mobiluncus en la etiología de la vaginosis bacteriana / Gardnerella vaginalis and mobiluncus in the etilogy of the bacterial vaginosis

Las vaginitis y las vaginosis bacterianas (VB) son infecciones muy frecuentes en la mujer. La primera se asocia con agentes específicos como cándida, trichomonas y chamydea. Sin embargo, hay una alta frecuencia de casos etiológicamente no definidos, que en el pasado fueron considerados como "vaginitis inespecíficas". Actualmente la mayoría de esos casos se definen con VB, un síndrome común y mal diagnosticado, cuya etiología es polimicrobiana asociada con un desequilibrio de la flora vaginal. Dos de los agentes más importantes, relacionados con VB son gardnerella vaginalis y mobiluncus spp. El primero fue descrito en 1953 como el agente responsable de las vaginitis inespecíficas; no obstante, su prevalencia similar en casos y controles y las inoculaciones en voluntarias no confirmaron su papel en las vaginitis. Hoy, los análisis cuantitativos de la población vaginal y el hallazgo de una citotoxina en este agente confirman su acción causal en las VB. Mobiluncus es una bacteria anaerobia, toxigénica relacionada con las VB y con otras patologías, como coriomnionitis, nacimientos a pretérmino, enfermedad inflamatoria pélvica post aborto y endometritis post cesárea. Este agente es de cultivo fastidioso; sin embargo, la tinción de Gram es el método diagnóstico más común para las VB

Mobiluncus SPP. en la vaginosis bacteriana: criterios diagnósticos / Mobilincus SPP. in the bacterial vaginosis: diagnostic criteria

Se evaluaron 30 pacientes remitidas al Servicio de Ginecología del hospital San Juan de Dios, 15 de ellas presentaban síntomas clínicos compatibles con vaginitis y 15 eran asintomáticas. De cada paciente se tomó una muestra de secreción vaginal, que se analizó microscópicamente a fresco y por tinción de Gram, se evaluó pH y se hizo la prueba de aminas. Dieciocho casos, incluyendo 3 asintomáticos, presentaron alteraciones de la flora vaginal, cuatro de los cuales fueron catalogados como vaginosis bacteriana. En tres de ellos se observaron bacterias similares a Mobiluncus, que se aisló de dos casos y se identificó como M. mulleris

Mobiluncus spp. en la vaginosis bacteriana: criterios diagnósticos / Mobiluncus spp. in bacterial vaginosis: diagnostic criteria

Se evaluaron 30 pacientes remitidas al Servicio de Ginecología del Hospital San Juan de Dios, 15 de ellas presentaban síntomas clínicos compatibles con vaginitis y 15 eran asintomáticas. De cada paciente se tomó una muestra de secreción vaginal, que se analizó microscópicamente a fresco y por tinción de Gram, se evaluó el pH y se hizo la prueba de aminas. Dieciocho casos, incluyendo 3 asintomáticos, presentaron alteraciones de la flora vaginal, cuatro de los cuales fueron catalogados como vaginosis bacteriana. En tres de ellos se observó bacterias similares a Mobiluncus, que se aisló de dos casos y se identificó como M. mulieris

Ultrastructural view of the bacterium Mobiculus mulieris: an approach to understand some problems for their isolation

Se hace una descripción ultraestructural de la bacteria Mobiluncus, uno de los agentes anaerobios involucrados en la causalidad del síndrome conocido como vaginosis bacteriana. M. mulieris es un bacilo curvo de ca. 3 µm de longitud, lofotrico, cuyos flagelos son subpolares. A partir del primoaislamiento pude cocultivarse accidentalmente con un coco Gram positivo y un bacilo Gram negativo, cuyas colonias, semejantes a las de Mobiluncus, miden menos de 0.2 µm de diámetro (límite de resolución del ojo humano), por lo que se recomienda analizar las placas de cultivo bajo el microscopio de disección.

Importância da detecçåo do Mobiluncus sp. nas gardnereloses resistentes ao tratamento com metronidazol / The importance of Mobiluncus sp. detection in vaginal infections caused by Gardnerella sp. which are results to metronidazole

O objetivo principal do trabalho é ressaltar o papel do citopatologista na detecçåo do bacilo curvo, móvel, anaeróbico, Gram-negativo e Gram-variável (Mobiluncus sp.) nas vaginoses bacterianas associadas principalmente à gardnerelose resistente. De um total de 506 exames citológicos rotineiros, vistos em um mês, foram detectados 77 esfregaços com flora bacteriana sugestiva de Gardnerella vaginalis. Utilizando-se lente de imersåo (o que rotineiramente nåo é feito pelo citopatologista), foi possível verificar a associaçåo de Mobiluncus sp. em 25 destas pacientes, quatro delas com resistência ao tratamento com metronidazol